c-Mpl Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-403035

Panoramica

MPL codifica il recettore della trombopoietina c-Mpl, un recettore per citochine di tipo I espresso prevalentemente nelle cellule staminali/progenitrici ematopoietiche e nella linea megacariocitica, dove regola autorinnovamento, sopravvivenza e produzione di piastrine. Il legame con il ligando attiva una segnalazione dipendente da JAK2 con, a valle, le vie STAT, PI3K/AKT e MAPK/ERK, che coordinano programmi di proliferazione e differenziamento nella nicchia del midollo osseo. Una segnalazione MPL deregolata e un’alterata funzione del recettore sono associate a una megacariopoiesi anomala e alla biologia delle malattie mieloidi, inclusi fenotipi legati a una risposta aberrante alle citochine e all’omeostasi delle cellule staminali. In quanto recettore a restrizione di linea con output di via ben definiti, c-Mpl rappresenta un nodo facilmente studiabile per analizzare la segnalazione citochinica, le decisioni di destino ematopoietico e il controllo di feedback mediato dal recettore.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Mpl (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene MPL in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del MPL insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto MPL a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina c-Mpl.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di MPL per lo studio della segnalazione di c-Mpl, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni MPL critici per la funzione di c-Mpl
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di MPL per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal c-Mpl CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal c-Mpl CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus MPL. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal c-Mpl Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR c-Mpl (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia MPL per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio MPL definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.