c-Maf Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-421531

Panoramica

Maf codifica c-Maf, un fattore di trascrizione della famiglia basic leucine zipper (bZIP) che regola programmi di espressione genica specifici di linea in tessuti immunitari ed endocrini. Nel topo, c-Maf è un determinante chiave della differenziazione delle cellule T e dell’espressione di citochine, contribuendo a reti trascrizionali che modellano la polarizzazione delle cellule T helper e le risposte dei macrofagi, e partecipa anche alla regolazione genica nel cristallino e nelle isole pancreatiche. c-Maf integra segnali provenienti dalle vie MAPK e da vie attivate da citochine per modulare l’accessibilità della cromatina e l’attività di promotori/enhancer nei loci bersaglio. Un’attività di MAF deregolata è stata associata a infiammazione immunomediata e a stati trascrizionali oncogenici nelle neoplasie ematologiche, a supporto del suo impiego come nodo meccanicistico in studi di vie di segnalazione e modelli di malattia.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO c-Maf (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Maf in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Maf insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Maf a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina c-Maf.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Maf per lo studio della segnalazione di c-Maf, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Maf critici per la funzione di c-Maf
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Maf per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal c-Maf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal c-Maf CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Maf. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal c-Maf Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR c-Maf (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Maf per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Maf definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.