c-IAP1 Plasmide Double Nickase (h): sc-417778-NIC

BIRC2 codifica la proteina inibitrice cellulare dell’apoptosi 1 (c-IAP1), una ligasi E3 dell’ubiquitina di tipo RING che coordina la segnalazione dipendente dall’ubiquitina a valle dei membri della superfamiglia dei recettori del TNF. c-IAP1 regola le vie di NF-κB canonica e non canonica tramite l’ubiquitinazione di RIPK1 e la modulazione della stabilità di NIK, influenzando così la segnalazione infiammatoria, la sopravvivenza cellulare e le decisioni di morte cellulare programmata. Interagisce inoltre con i checkpoint apoptotici e necroptotici influenzando l’attivazione della caspasi-8 e la dinamica del complesso di segnalazione induttore di morte (DISC). Un’espressione o un’attività deregolata di BIRC2 è stata associata a una diversa resistenza all’apoptosi e a un rimodellamento delle vie infiammatorie in molte neoplasie e in contesti immuno-correlati, rendendolo un bersaglio frequente per studi meccanicistici della segnalazione TNF/NF-κB.

c-IAP1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BIRC2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BIRC2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BIRC2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BIRC2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.