c-Fgr Plasmide Double Nickase (h): sc-400702-NIC

FGR codifica c-Fgr, una tirosin-chinasi della famiglia Src non recettoriale, arricchita nelle cellule della linea mieloide, dove integra segnali provenienti da immunorecettori e integrine con cascate di fosforilazione intracellulari. c-Fgr contribuisce alla regolazione dell’adesione, della migrazione, della degranulazione e della segnalazione fagocitica dei leucociti, interfacciandosi con vie quali la segnalazione dei recettori Fc, le reti chinasi dipendenti da ITAM e i moduli di rimodellamento del citoscheletro, inclusi PI3K e MAPK/ERK. Attraverso queste funzioni, FGR è rilevante per la segnalazione infiammatoria e per gli stati di attivazione delle cellule dell’immunità innata, e alterazioni dell’attività delle chinasi della famiglia Src sono state associate a processi ematopoietici e immunitari deregolati. La c-Fgr umana è pertanto ampiamente studiata nei meccanismi di cross-talk tra recettori immunitari, amplificazione del segnale e controllo della motilità cellulare dipendente dalle chinasi.

c-Fgr Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FGR nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FGR. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FGR. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FGR interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.