C/EBP ε Plasmide Double Nickase (h): sc-402310-NIC

CEBPE codifica C/EBPε, un fattore di trascrizione bZIP a espressione ristretta alla linea cellulare, che coordina le fasi tardive della granulopoiesi regolando programmi genici necessari per la differenziazione dei neutrofili, la biogenesi dei granuli e la maturazione terminale. Attraverso il legame ai siti CCAAT/enhancer in elementi promotori ed enhancer, C/EBPε si integra con reti trascrizionali mieloidi che coinvolgono membri della famiglia C/EBP, PU.1 e la segnalazione responsiva al G-CSF, per indurre l’espressione di geni effettrici antimicrobici e di geni che promuovono l’uscita dal ciclo cellulare. L’alterazione della trascrizione dipendente da CEBPE è associata a uno sviluppo dei neutrofili compromesso e a difetti funzionali dell’immunità innata, rendendola rilevante per lo studio dei checkpoint della differenziazione mieloide e delle vie effettrici dei neutrofili. In biologia del cancro e nella ricerca sull’ematopoiesi, un’attività alterata di CEBPE viene inoltre utilizzata come marcatore dello stato di maturazione mieloide e della disregolazione trascrizionale in contesti leucemici.

C/EBP ε Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CEBPE nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CEBPE. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CEBPE. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CEBPE interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.