BTG4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-408621-LAC

BTG4 (B-cell translocation gene 4) codifica un membro della famiglia di proteine antiproliferative BTG/TOB, coinvolte nella regolazione genica post-trascrizionale e nel controllo della progressione del ciclo cellulare. BTG4 è caratterizzato soprattutto per il suo ruolo nella deadenilazione e nel turnover dell’mRNA attraverso interazioni con componenti del complesso CCR4–NOT, contribuendo alla regolazione temporale dei programmi di espressione genica durante le transizioni di stato cellulare. Grazie alla sua influenza sulla stabilità dei trascritti e su vie associate alla proliferazione, un’alterata attività di BTG4 è stata associata a una crescita cellulare e a fenotipi di differenziamento disregolati, rilevanti per la biologia del cancro e per i processi riproduttivi/di sviluppo. BTG4 umano rappresenta quindi un nodo utile per studiare il metabolismo dell’RNA, i checkpoint del ciclo cellulare e le reti regolatorie che determinano il destino cellulare.

Le particelle di attivazione lentivirale BTG4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BTG4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BTG4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BTG4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BTG4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BTG4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.