BTG2 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-419374-ACT

Btg2 (BTG2) è un regolatore antiproliferativo a risposta immediata (immediate-early) che modula la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la trascrizione sensibile allo stress nelle cellule murine. BTG2 interagisce con i meccanismi di controllo trascrizionale e con le vie del turnover dell’mRNA, incluse le interazioni con i complessi deadenilasici CCR4–NOT, collegando i segnali mitogenici a cambiamenti nell’espressione genica e alla limitazione della crescita cellulare. È spesso studiato nel contesto della segnalazione del danno al DNA e delle risposte associate a p53, in cui un’attività alterata di BTG2 può influenzare il controllo dei checkpoint, la suscettibilità all’apoptosi e i programmi di senescenza cellulare. Una espressione deregolata di BTG2 è stata associata alla trasformazione oncogena e alla progressione tumorale in molteplici sistemi modello, rendendolo rilevante per studi meccanicistici sul controllo della proliferazione e sulle reti trascrizionali associate al cancro.

BTG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Btg2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BTG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Btg2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Btg2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BTG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Btg2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BTG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BTG2 nelle cellule tumorali con espressione di Btg2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.