BTG2 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401022-ACT

BTG2 (gene 2 della traslocazione nelle cellule B) codifica una proteina antiproliferativa a risposta immediata (immediate-early) che funge da coregolatore della trascrizione e da modulatore della deadenilazione dell’mRNA, plasmando programmi di espressione genica che controllano la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress cellulare. BTG2 è comunemente indotto a valle di p53 e integra segnali che promuovono il controllo del checkpoint G1/S, la differenziazione e l’apoptosi attraverso interazioni con componenti del complesso CCR4–NOT e altri cofattori regolatori. Un’alterata espressione di BTG2 è stata associata a proliferazione deregolata e instabilità genomica in molteplici contesti rilevanti per il cancro, ed è inoltre collegata a processi infiammatori e neurobiologici tramite ampi effetti sulla regolazione trascrizionale e post-trascrizionale. Queste proprietà rendono BTG2 un nodo utile per studiare le reti di controllo della crescita, la segnalazione della risposta al danno al DNA e la riprogrammazione trascrizionale dipendente dal contesto nelle cellule umane.

BTG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BTG2 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BTG2 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BTG2 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BTG2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BTG2. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BTG2 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BTG2 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BTG2 nelle cellule tumorali con espressione di BTG2 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.