Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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BTEB2 Plasmide Double Nickase (m): sc-419372-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BTEB2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BTEB2 Double Nickase Plasmid (m) e il BTEB2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Klf5. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BTEB2 Antibody (G-7): sc-398470
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BTEB2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419372-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BTEB2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419372-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Klf5 codifica il fattore di trascrizione BTEB2 (Krüppel-like factor 5), una proteina legante il DNA a dita di zinco che regola programmi di proliferazione e differenziamento nelle linee epiteliali e mesenchimali. BTEB2 integra segnali dalle vie MAPK/ERK, Wnt/β-catenina, TGF-β e PI3K/AKT per controllare la progressione del ciclo cellulare, la migrazione e il rimodellamento della matrice extracellulare. Durante lo sviluppo e l’omeostasi tissutale, l’attività di Klf5 influenza la dinamica delle cripte intestinali, i fenotipi vascolari e della muscolatura liscia e gli epiteli di barriera attraverso reti trascrizionali dipendenti dal contesto. Un’espressione deregolata di Klf5/BTEB2 è stata associata a rimodellamento infiammatorio, fibrosi e stati trascrizionali oncogeni, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo della crescita e sulla plasticità di linea cellulare.
BTEB2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Klf5 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Klf5. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Klf5. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Klf5 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.