BTEB1 Plasmide Double Nickase (m): sc-421299-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BTEB1 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BTEB1 Double Nickase Plasmid (m) e il BTEB1 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Klf9. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BTEB1 Antibody (A-5): sc-376422
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BTEB1 Plasmide Double Nickase (m) | sc-421299-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BTEB1 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-421299-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Klf9 codifica BTEB1 (Kruppel-like factor 9), un fattore di trascrizione a dita di zinco C2H2 che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare programmi di espressione genica dipendenti dal contesto. Nelle cellule di topo, BTEB1 integra segnali provenienti da vie ormonali nucleari e da vie responsiva allo stress per modulare la differenziazione, il controllo del ciclo cellulare e l’omeostasi metabolica, spesso tramite interazioni con le reti trascrizionali Sp/KLF e con regolatori della cromatina. L’attività di Klf9 è stata collegata alla maturazione neuronale, alla trascrizione responsiva agli ormoni endocrini e a processi di rimodellamento tissutale, risultando quindi rilevante per studi di biologia dello sviluppo e di riprogrammazione trascrizionale dipendente dagli stimoli. Un’espressione deregolata di Klf9/BTEB1 è stata associata ad alterazioni degli stati di proliferazione e differenziazione in modelli rilevanti per la malattia, supportandone l’uso come nodo per interrogare in modo meccanicistico le vie di segnalazione.
BTEB1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Klf9 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Klf9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Klf9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Klf9 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.