BTEB1 Plasmide Double Nickase (h): sc-402170-NIC

KLF9 (noto anche come BTEB1) codifica un fattore di trascrizione a dita di zinco di tipo Krüppel-like che si lega a elementi promotori ricchi in GC per regolare programmi di espressione genica dipendenti dal contesto, che controllano la differenziazione, la progressione del ciclo cellulare e le risposte allo stress cellulare. BTEB1 integra segnali provenienti da vie associate ai recettori nucleari e alla MAPK per modulare gli output trascrizionali che plasmano metabolismo, sviluppo e rimodellamento tissutale. Un’alterata espressione di KLF9 è stata associata a una gestione disfunzionale dello stress ossidativo e a reti trascrizionali aberranti osservate in molteplici contesti rilevanti per la malattia, inclusi fenotipi endocrini e neurologici e la biologia tumorale. In quanto regolatore trascrizionale con ampia occupazione dei promotori, KLF9 è spesso studiato per l’architettura dei suoi geni bersaglio a valle e per il suo ruolo nel determinare stati trascrizionali specifici di linea cellulare.

BTEB1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus KLF9 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di KLF9. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di KLF9. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con KLF9 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.