Brn-3b/BRN3B/POU4F2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400382-LAC

POU4F2 (Brn-3b/BRN3B) è un fattore di trascrizione con dominio POU-homeobox che controlla programmi di espressione genica specifici per tipo cellulare, con ruoli di primo piano nello sviluppo, nella differenziazione e nella sopravvivenza dei neuroni. Legandosi a motivi regolatori del DNA e coordinando reti trascrizionali, BRN3B influenza processi quali la guida assonale, la maturazione sinaptica e la trascrizione responsiva allo stress. Nei sistemi umani, un’alterazione dell’attività di POU4F2 viene utilizzata per indagare i meccanismi di regolazione dello sviluppo neurobiologico e della specificazione di linea cellulare, e i suoi bersagli a valle sono collegati a vie che governano l’apoptosi, il controllo del ciclo cellulare e l’identità neuronale. Queste caratteristiche rendono POU4F2 un nodo utile per studiare i circuiti trascrizionali in modelli neurali e le perturbazioni rilevanti per la malattia che influenzano il destino e la resilienza dei neuroni.

Le particelle di attivazione lentivirale Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di POU4F2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Brn-3b/BRN3B/POU4F2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione POU4F2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Brn-3b/BRN3B/POU4F2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo POU4F2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.