Plasmide CRISPR d'Activation (h) BRDG1: sc-409252-ACT

STAP1 code pour BRDG1, une protéine adaptatrice enrichie dans les lignées hématopoïétiques, qui couple les signaux proximaux aux récepteurs aux voies effectrices en aval grâce à des domaines d’interaction modulaires. BRDG1 participe à la signalisation associée au récepteur des cellules B (BCR) et aux cytokines, en coordonnant des interactions protéine–protéine qui influencent les cascades de phosphorylation et des programmes transcriptionnels liés à l’activation et à la différenciation des lymphocytes. Une expression altérée de STAP1 ou des variations de séquence ont été étudiées dans le contexte d’une signalisation immunitaire dérégulée et de phénotypes associés au métabolisme des lipides, notamment dans des études menées sur des cohortes d’hypercholestérolémie familiale. Ainsi, STAP1/BRDG1 est fréquemment utilisé comme outil moléculaire pour interroger l’architecture des réseaux de signalisation, les transitions d’état des cellules immunitaires et les interactions croisées entre voies dans des modèles cellulaires humains.

BRDG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) offre une approche ciblée et non destructive pour réguler à la hausse l'expression endogène de STAP1 sans modifier la séquence d'ADN sous-jacente.

BRDG1 Le plasmide d'activation CRISPR (h) est un système SAM (synergistic activation mediator) à trois plasmides conçu pour une régulation à la hausse hautement efficace et spécifique du locus STAP1 dans des lignées cellulaires humaines. Le système s'articule autour d'une Cas9 catalytiquement inactive (dCas9) portant deux mutations inactivantes (D10A et N863A) qui éliminent l'activité nucléase tout en préservant la liaison à l'ADN. Cette dCas9 est fusionnée à VP64, un puissant activateur transcriptionnel, et est co-exprimée avec un gène de résistance à la blasticidine pour la sélection. Le deuxième plasmide code pour la protéine de fusion MS2-p65-HSF1, un complexe activateur secondaire qui agit de concert avec dCas9-VP64, ainsi qu'un gène de résistance à l'hygromycine. Le troisième plasmide code pour un ARN guide (sgRNA) de 20 nt spécifique de la cible, fusionné à deux aptamères d'ARN MS2 qui recrutent le complexe MS2-p65-HSF1 vers le site d'activation, accompagné d'un gène de résistance à la puromycine. Les trois plasmides sont délivrés dans un rapport massique de 1:1:1 pour une expression équilibrée de tous les composants du système.

Une fois assemblé au locus cible, le complexe SAM se lie à environ 200 pb en amont du site de départ de la transcription STAP1, où VP64, p65 et HSF1 agissent de concert pour recruter la machinerie transcriptionnelle et induire une régulation à la hausse de l'expression endogène de BRDG1. Contrairement à Cas9, qui possède une activité nucléase, dCas9 n'introduit pas de cassures double brin ni ne modifie la séquence génomique, préservant ainsi le locus STAP1 natif et permettant l'étude des réponses transcriptionnelles dépendantes de BRDG1 au niveau du locus endogène, ce qui en fait un outil précieux pour les études fonctionnelles, l'identification de gènes cibles et la modélisation de la restauration de la voie BRDG1 dans les cellules tumorales présentant une expression de STAP1 silencée ou réduite.

Réservé à la recherche. N'est pas destiné à un usage diagnostique ou thérapeutique.