BRDG1 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-409252-ACT

STAP1 codifica BRDG1, una proteina adattatrice arricchita nelle linee ematopoietiche che collega i segnali prossimali ai recettori alle vie effettrici a valle tramite domini di interazione modulari. BRDG1 partecipa alla segnalazione associata al recettore delle cellule B e alle citochine, coordinando interazioni proteina–proteina che influenzano cascate di fosforilazione e programmi trascrizionali legati all’attivazione e alla differenziazione dei linfociti. Alterazioni dell’espressione di STAP1 o variazioni di sequenza sono state studiate nel contesto di una segnalazione immunitaria disregolata e di fenotipi associati al metabolismo lipidico, inclusi studi in coorti con ipercolesterolemia familiare. Di conseguenza, STAP1/BRDG1 è spesso utilizzato come strumento molecolare per interrogare l’architettura delle reti di segnalazione, le transizioni di stato delle cellule immunitarie e il crosstalk tra vie in modelli cellulari umani.

BRDG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di STAP1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BRDG1 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus STAP1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione STAP1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BRDG1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus STAP1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BRDG1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BRDG1 nelle cellule tumorali con espressione di STAP1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.