BRD4 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400519-LAC

BRD4 (proteina 4 contenente bromodomini) è un “lettore” della cromatina che si lega agli istoni acetilati tramite i suoi bromodomini e contribuisce a coordinare l’inizio e l’allungamento della trascrizione reclutando P-TEFb e regolando il rilascio della pausa della RNA polimerasi II. È un componente chiave del controllo epigenetico a livello di enhancer e super-enhancer, integrando segnali cellulari nei programmi di espressione genica che governano la progressione del ciclo cellulare, l’infiammazione e la differenziazione specifica di linea. Le reti trascrizionali dipendenti da BRD4 intersecano vie come la segnalazione NF-κB e i programmi guidati da MYC, rendendo BRD4 un nodo centrale negli studi sulla “dipendenza trascrizionale” e sugli stati di cromatina deregolati. Alterazioni dell’attività di BRD4 e il rimodellamento degli enhancer sono associati a fenotipi proliferativi e infiammatori, a supporto del suo impiego in ricerche meccanicistiche in oncologia, immunologia e regolazione genica dello sviluppo.

Le particelle di attivazione lentivirale BRD4 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BRD4 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BRD4 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BRD4, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BRD4. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BRD4 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.