BRCA2 Plasmide Double Nickase (m): sc-419363-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BRCA2 Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BRCA2 Double Nickase Plasmid (m) e il BRCA2 Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Brca2. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BRCA2 Plasmide Double Nickase (m) | sc-419363-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRCA2 Plasmide Double Nickase (m2) | sc-419363-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Il gene murino Brca2 codifica BRCA2, un mediatore centrale della ricombinazione omologa che promuove l’assemblaggio dei filamenti di RAD51 e governa la riparazione ad alta fedeltà delle rotture a doppio filamento del DNA. BRCA2 coordina la protezione e il recupero della forcella di replicazione, contribuendo a prevenire l’instabilità genomica indotta dallo stress replicativo durante la fase S. Attraverso i suoi ruoli nella segnalazione della risposta al danno al DNA e nei processi di riparazione associati alla cromatina, BRCA2 sostiene la corretta segregazione dei cromosomi e sopprime l’accumulo di riarrangiamenti dannosi. L’alterazione della funzione di BRCA2 è ampiamente utilizzata come modello per studiare la riparazione difettosa guidata dall’omologia, la sensibilità modificata agli agenti che danneggiano il DNA e i processi mutazionali collegati alla biologia della predisposizione al cancro.
BRCA2 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Brca2 nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Brca2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Brca2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Brca2 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.