BRAF Plasmide Double Nickase (h): sc-400121-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- BRAF Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il BRAF Double Nickase Plasmid (h) e il BRAF Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BRAF. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: BRAF Antibody (F-7): sc-5284
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
BRAF Plasmide Double Nickase (h) | sc-400121-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
BRAF Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400121-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BRAF codifica una chinasi proteica serina/treonina che funge da effettore chiave a valle di RAS, propagando il segnale attraverso la cascata RAF–MEK–ERK/MAPK. Regolando, in modo dipendente dalla fosforilazione, il controllo di programmi trascrizionali, la progressione del ciclo cellulare, la differenziazione e la sopravvivenza, BRAF integra segnali extracellulari in risposte cellulari coordinate. Un’attività di BRAF deregolata è associata a una segnalazione MAPK aberrante e a un controllo della crescita alterato in molteplici contesti rilevanti per la patologia, rendendolo un nodo ampiamente utilizzato per analizzare le reti di segnalazione oncogeniche. Il BRAF umano è quindi frequentemente oggetto di studio nella mappatura delle vie di segnalazione, negli studi genotipo–fenotipo e nelle analisi dei feedback di segnalazione e del crosstalk con PI3K/AKT e con le vie di risposta allo stress.
BRAF Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BRAF nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BRAF. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BRAF. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BRAF interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.