bradykinin B2 R Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419318-LAC

O gene Bdkrb2 de camundongo codifica o receptor B2 de bradicinina (bradykinin B2 R, B2R), um receptor acoplado à proteína G expresso constitutivamente que se liga à bradicinina e a cininas relacionadas para regular o tônus vascular, a permeabilidade endotelial e a sinalização nociceptiva. Após a ligação do ligante, o B2R acopla-se predominantemente às vias de Gq/11 e Gi para estimular a mobilização de cálcio dependente de PLCβ, a produção de óxido nítrico e prostaglandinas e a sinalização subsequente de MAPK/ERK, que molda respostas inflamatórias e ao estresse. A atividade de Bdkrb2 interage com a dinâmica do sistema calicreína–cinina e estabelece comunicação cruzada com a sinalização renina–angiotensina, influenciando a homeostase hemodinâmica e a remodelação tecidual. A sinalização desregulada do B2R tem sido implicada em modelos experimentais de inflamação, hipersensibilidade à dor, edema e fisiopatologia cardiovascular e renal, tornando-o um alvo útil para estudos mecanísticos nesses contextos.

As Partículas de Ativação Lentivirais bradykinin B2 R (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Bdkrb2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais bradykinin B2 R (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Bdkrb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de bradykinin B2 R. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Bdkrb2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.