brachyury Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-423247

Panoramica

Il gene T del topo codifica la brachiuria (brachyury), un fattore di trascrizione della famiglia T-box essenziale per la formazione del mesoderma, la progressione della stria primitiva e lo sviluppo dell’asse corporeo posteriore durante l’embriogenesi. La brachiuria regola programmi di specificazione di linea e coordina reti trascrizionali che controllano le decisioni di destino cellulare, la patterning dei tessuti e i movimenti morfogenetici, integrandosi con input di segnalazione quali le vie WNT, FGF e TGF-β/SMAD. Un’attività deregolata della brachiuria è stata collegata a una differenziazione mesenchimale aberrante e a un’espressione genica associata alla transizione epitelio–mesenchimale, a sostegno della sua rilevanza per difetti dello sviluppo e per la riprogrammazione trascrizionale associata a malattie.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO brachyury (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene T in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del T insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto T a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina brachyury.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di T per lo studio della segnalazione di brachyury, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni T critici per la funzione di brachyury
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di T per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal brachyury CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal brachyury CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus T. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal brachyury Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR brachyury (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia T per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio T definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.