BPAG1 Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-403388-ACT

O DST codifica o antígeno 1 do penfigoide bolhoso (BPAG1), uma grande proteína citoligante que conecta filamentos intermediários a complexos associados à membrana e dá suporte à organização do citoesqueleto, ao transporte de vesículas e à resiliência mecânica celular. Isoformas humanas de BPAG1 são proeminentes em epitélios estratificados e neurônios, onde ajudam a manter a integridade dos hemidesmossomos e a estabilizar a adesão célula–matriz. Por meio dessas funções estruturais, o BPAG1 influencia processos como migração, polaridade e sinalização de resposta ao estresse, que dependem de uma comunicação coordenada entre actina, microtúbulos e filamentos intermediários. A desregulação ou antigenicidade alterada do BPAG1 está associada a patologias cutâneas com formação de bolhas e a fenótipos neurodegenerativos, tornando o DST um alvo útil para estudar disfunções do citoesqueleto e mecanismos de fragilidade tecidual.

BPAG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de DST sem alterar a sequência de ADN subjacente.

BPAG1 O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus DST em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição DST, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de BPAG1. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus DST nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de BPAG1 no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via BPAG1 em células tumorais com expressão de DST silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.