BMP-8A Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406589

Panoramica

BMP8A codifica la proteina morfogenetica ossea 8A (BMP-8A), un ligando secreto della superfamiglia TGF-β che segnala attraverso i recettori BMP per attivare programmi trascrizionali dipendenti da SMAD1/5/9. BMP-8A contribuisce alla regolazione del patterning dello sviluppo, della differenziazione e del rimodellamento tissutale e può influenzare processi cellulari quali proliferazione, impegno di linea e dinamiche della matrice extracellulare. Nell’ambito della più ampia rete di segnalazione BMP, BMP8A interagisce con vie che governano morfogenesi e organogenesi e può modulare il crosstalk con MAPK e altre cascate di segnalazione specifiche del contesto. Un’attività deregolata della via BMP, inclusa un’alterata disponibilità del ligando, è associata a fenotipi di sviluppo anomali ed è stata studiata in contesti rilevanti per la malattia che coinvolgono fibrosi, biologia scheletrica e segnalazione nel microambiente tumorale.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BMP-8A (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene BMP8A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del BMP8A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto BMP8A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BMP-8A.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di BMP8A per lo studio della segnalazione di BMP-8A, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni BMP8A critici per la funzione di BMP-8A
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di BMP8A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BMP-8A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal BMP-8A CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus BMP8A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BMP-8A Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR BMP-8A (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia BMP8A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio BMP8A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.