BMP-6 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401979-ACT

BMP6 umano codifica la proteina morfogenetica ossea 6 (BMP-6), un ligando secreto della superfamiglia del TGF-β che segnala attraverso i recettori BMP di tipo I/II per attivare SMAD1/5/8 e programmi trascrizionali che controllano la differenziazione osteogenica, il rimodellamento della matrice extracellulare e la patterning dello sviluppo. BMP-6 interagisce anche con la segnalazione correlata a MAPK e PI3K per influenzare le decisioni sul destino cellulare e l’omeostasi tissutale in modo dipendente dal contesto. Nel fegato, BMP-6 è un regolatore a monte fondamentale del metabolismo del ferro tramite l’induzione dell’epcidina (HAMP), collegando la segnalazione BMP/SMAD all’equilibrio sistemico del ferro. Un’attività deregolata della via di BMP6 è stata associata ad alterazioni della biologia ossea, a processi legati alla fibrosi e a fenotipi di omeostasi del ferro, rendendola rilevante per studi meccanicistici della segnalazione BMP e della regolazione metabolica.

BMP-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BMP6 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BMP-6 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BMP6 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BMP6, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BMP-6. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BMP6 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BMP-6 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BMP-6 nelle cellule tumorali con espressione di BMP6 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.