BMAL1 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400808-LAC

ARNTL (BMAL1) codifica un fattore di trascrizione fondamentale con dominio PAS di tipo basic helix–loop–helix, che forma eterodimeri con CLOCK/NPAS2 per guidare l’espressione genica circadiana. Attraverso il legame alle E-box, BMAL1 regola circuiti di feedback trascrizionale–traduzionale che coinvolgono le proteine PER e CRY e coordina programmi oscillatori nel metabolismo, nel controllo del ciclo cellulare, nelle risposte al danno al DNA e nell’omeostasi redox. Questo circuito circadiano interagisce con le vie di segnalazione endocrine e immunitarie, contribuendo alla temporizzazione, specifica per tessuto, delle risposte infiammatorie e dei flussi metabolici. La deregolazione di ARNTL è stata associata a disturbi del sonno e del ritmo circadiano ed è stata implicata, in studi sperimentali e genetici, in fenotipi cardiometabolici, neuropsichiatrici e correlati al cancro.

Le particelle di attivazione lentivirale BMAL1 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ARNTL in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BMAL1 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ARNTL, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BMAL1. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ARNTL e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.