BMAL1 Plasmide Double Nickase (m): sc-419206-NIC

Arntl codifica il principale fattore di trascrizione circadiano BMAL1, che forma un eterodimero con CLOCK per legarsi agli elementi E-box e guidare l’espressione ritmica dei geni controllati dall’orologio. Questa rete di feedback trascrizione–traduzione coordina le oscillazioni cellulari del metabolismo, dell’omeostasi redox, delle risposte al danno del DNA e della segnalazione immunitaria nei diversi tessuti. L’attività di BMAL1 si integra con vie che includono la repressione mediata da PER/CRY, i circuiti dei recettori nucleari REV-ERB/ROR e i programmi di sensing dei nutrienti che modulano la funzione mitocondriale e l’utilizzo di lipidi e glucosio. Una segnalazione ARNTL/BMAL1 deregolata è stata associata a fenotipi del ciclo sonno–veglia e comportamentali nei sistemi modello ed è spesso studiata nel contesto di processi metabolici, infiammatori, neurodegenerativi e oncologici, in cui il controllo circadiano modula programmi di espressione genica rilevanti per la malattia.

BMAL1 Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Arntl nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Arntl. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Arntl. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Arntl interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.