BLCAM Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401451-ACT

CD22 (BLCAM) è una lectina di tipo immunoglobulinico legante l’acido sialico, espressa in modo selettivo sulle cellule B, che funge da corecettore inibitorio del recettore delle cellule B (BCR), modulando le soglie di segnalazione indotte dall’antigene. Attraverso motivi inibitori basati sulla tirosina (ITIM), recluta fosfatasi come SHP-1/SHIP per regolare l’attività delle chinasi prossimali e le vie a valle, incluse PI3K/AKT, MAPK e i flussi di calcio, contribuendo così a definire attivazione, sopravvivenza e tolleranza delle cellule B. CD22 partecipa anche all’adesione e al traffico delle cellule B tramite interazioni dipendenti dai glicani sulla superficie cellulare. Un’espressione o una segnalazione disregolata di CD22 è stata associata ad alterazioni dell’omeostasi immunitaria ed è frequentemente studiata nel contesto delle neoplasie delle cellule B e di fenotipi delle cellule B rilevanti per l’autoimmunità.

CD22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di CD22 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

CD22 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus CD22 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione CD22, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di CD22. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus CD22 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da CD22 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via CD22 nelle cellule tumorali con espressione di CD22 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.