betaKlotho Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401614

Panoramica

KLB codifica betaKlotho, un co-recettore transmembrana a singolo passaggio che conferisce specificità di ligando ai fattori di crescita dei fibroblasti endocrini, in particolare FGF19 e FGF21, attraverso la formazione di complessi con i recettori FGFR. Nei tessuti umani come fegato e tessuto adiposo, la segnalazione dipendente da betaKlotho regola l’attivazione della via MAPK/ERK e programmi trascrizionali che controllano l’omeostasi degli acidi biliari, l’utilizzo dei lipidi, il metabolismo del glucosio e il bilancio energetico. Alterazioni dell’espressione di KLB o della funzione di betaKlotho sono state collegate a disfunzioni metaboliche, inclusi fenotipi associati all’obesità, insulino-resistenza e steatosi epatica non alcolica, e possono modulare la segnalazione da stress e infiammatoria nelle cellule metabolicamente attive. Queste caratteristiche rendono KLB un nodo utile per analizzare le vie degli FGF endocrini e il crosstalk metabolico specifico di tessuto.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO betaKlotho (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene KLB in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del KLB insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto KLB a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina betaKlotho.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di KLB per lo studio della segnalazione di betaKlotho, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni KLB critici per la funzione di betaKlotho
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di KLB per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal betaKlotho CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal betaKlotho CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus KLB. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal betaKlotho Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR betaKlotho (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia KLB per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio KLB definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.