Not CRISPR data: the image illustrates antibody quality for visualizing CRISPR experiment results.
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beta Synuclein Plasmide Double Nickase (m): sc-430508-NIC
- Specie Target: mouse
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- beta Synuclein Plasmide Double Nickase (m) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il beta Synuclein Double Nickase Plasmid (m) e il beta Synuclein Double Nickase Plasmid (m2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira Sncb. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: beta Synuclein Antibody (8): sc-136452
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
beta Synuclein Plasmide Double Nickase (m) | sc-430508-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
beta Synuclein Plasmide Double Nickase (m2) | sc-430508-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
Sncb codifica la beta-sinucleina, una proteina neuronale presinaptica che si associa alle vescicole sinaptiche e modula il rilascio di neurotrasmettitori e la plasticità sinaptica. Nel cervello del topo, la beta-sinucleina partecipa a vie che regolano il traffico vescicolare, la curvatura di membrana e la proteostasi, e può influenzare il comportamento di aggregazione di altri membri della famiglia delle sinucleine. Alterazioni dell’omeostasi delle sinucleine sono state collegate a meccanismi neurodegenerativi che coinvolgono misfolding proteico, difetti nel trasporto assonale e disfunzione sinaptica. Sncb è quindi ampiamente utilizzato come strumento molecolare per analizzare il mantenimento delle sinapsi, le risposte neuronali allo stress e le interazioni della rete delle sinucleine in vivo e in neuroni in coltura.
beta Synuclein Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Sncb nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Sncb. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Sncb. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Sncb interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.