beta-catenin Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400038-LAC

CTNNB1 codifica la beta-catenina umana, una proteina multifunzionale che collega l’adesione cellula-cellula mediata dalle caderine alla regolazione genica. Nella via canonica Wnt, la beta-catenina stabilizzata si accumula nel nucleo e si associa ai fattori di trascrizione TCF/LEF per controllare programmi che governano proliferazione, differenziamento e mantenimento delle cellule staminali. La sua attività è limitata dal complesso di degradazione APC–AXIN–GSK3β, che collega i livelli di beta-catenina a un turnover dipendente dalla fosforilazione. La segnalazione deregolata di CTNNB1 e le alterazioni della dinamica delle giunzioni sono ampiamente studiate nella biologia dei tumori, nei disturbi dello sviluppo e nel rimodellamento trascrizionale associato alla fibrosi.

Le particelle di attivazione lentivirale beta-catenin (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di CTNNB1 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale beta-catenin (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione CTNNB1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di beta-catenin. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo CTNNB1 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.