beta-catenin Plasmide Double Nickase (h): sc-400038-NIC

CTNNB1 codifica la β-catenina umana, una proteina multifunzionale che collega le giunzioni aderenti basate sulle caderine al citoscheletro di actina e funge da co-regolatore trascrizionale nella segnalazione canonica Wnt. In assenza di ligandi Wnt, la β-catenina viene fosforilata dal complesso di degradazione APC–AXIN–GSK3 e indirizzata alla degradazione proteasomiale; al contrario, l’attivazione della via stabilizza la β-catenina e promuove la coattivazione nucleare di programmi genici dipendenti da TCF/LEF che controllano proliferazione, differenziamento e mantenimento delle cellule staminali. Un’attività aberrante o la stabilizzazione di CTNNB1 altera le decisioni di destino cellulare, l’integrità epiteliale e la patterning dello sviluppo, ed è frequentemente implicata nella segnalazione oncogenica e in displasie specifiche di tessuto. In quanto effettore nodale che integra l’adesione cellulare e gli output della via Wnt, CTNNB1 è ampiamente studiato in contesti quali EMT, inibizione da contatto, biologia degli organoidi e crosstalk di via con Hippo e la segnalazione dei fattori di crescita.

beta-catenin Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus CTNNB1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di CTNNB1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di CTNNB1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con CTNNB1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.