beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β₂-AR Lentiviral Ativação Partículas de ativação de lentivirus (m): sc-419027-LAC

Adrb2 codifica o receptor β2-adrenérgico de camundongo (ADRB2/β2-AR), um receptor acoplado à proteína G que responde às catecolaminas para regular a sinalização de cAMP/PKA e os programas transcricionais a jusante. Além do acoplamento clássico a Gs, o ADRB2 participa da dessensibilização dependente de GRK/β-arrestina, da internalização do receptor e da modulação da via MAPK, conectando a sinalização aguda a uma adaptação celular de mais longo prazo. Em diversos tecidos, o β2-AR influencia o tônus do músculo liso, a regulação cardíaca e metabólica e a sinalização em células imunes, tornando o Adrb2 um nó-chave em redes de resposta ao estresse. Alterações na expressão do ADRB2 ou na dinâmica de sua sinalização têm sido associadas à hiperresponsividade das vias aéreas, a fenótipos cardiovasculares e à biologia inflamatória, sustentando estudos mecanísticos em múltiplos contextos relevantes para doenças.

As Partículas de Ativação Lentivirais beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR (m) respondem a esta necessidade ao encapsular o sistema completo de ativação transcricional do mediador de ativação sinérgica (SAM) em partículas lentivirais de alto título, prontas para transdução, permitindo uma regulação positiva eficiente de Adrb2 numa gama mais ampla de tipos de células humanas.

As Partículas de Ativação Lentivirais beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR (m) fornecem todos os componentes funcionais do sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) através da transdução lentiviral. O sistema compreende três preparações de partículas co-transduzidas em células-alvo: uma que codifica dCas9 cataliticamente inativo (mutações D10A e N863A) fundido ao domínio de transativação VP64 com um gene de resistência à blasticidina; uma que codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1 com um gene de resistência à higromicina; e uma que codifica um sgRNA de 20 nt específico do alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 com um gene de resistência à puromicina. Após a transdução lentiviral e a integração genómica das cassetes de expressão, os componentes do SAM são expressos de forma estável e reúnem-se no locus-alvo dentro da região promotora proximal a montante do local de início da transcrição Adrb2, onde VP64, p65 e HSF1 atuam cooperativamente para recrutar a maquinaria transcricional endógena e impulsionar a regulação positiva sustentada da expressão endógena de beta 2 Adrenergic Receptor/ADRB2/β2-AR. A utilização de dCas9 inativo em termos de nuclease evita a introdução de quebras de DNA de cadeia dupla e preserva o locus genómico nativo Adrb2 e a arquitetura reguladora.

O formato lentiviral oferece várias vantagens práticas: a integração genómica estável suporta a ativação hereditária ao longo das divisões celulares; as preparações de partículas de alto título eliminam a necessidade de produção viral interna; e a compatibilidade com tipos de células primárias, não divisíveis e resistentes à transfecção amplia a acessibilidade experimental. A transdução bem-sucedida pode ser confirmada e enriquecida através de seleção tripla com antibióticos utilizando puromicina, higromicina e blasticidina.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.