Bek/FGFR2 Plasmide Double Nickase (h): sc-400249-NIC

FGFR2 (Bek) codifica un recettore tirosin-chinasico per molteplici fattori di crescita dei fibroblasti, che regola lo sviluppo embrionale e l’omeostasi dei tessuti adulti coordinando proliferazione, sopravvivenza, migrazione e differenziamento cellulari. Il legame del ligando induce la dimerizzazione del recettore e l’autofosforilazione, attivando i programmi canonici di segnalazione MAPK/ERK, PI3K–AKT, PLCγ–PKC e STAT e modulando il cross-talk con segnali provenienti da integrine e matrice extracellulare. La segnalazione di FGFR2 è strettamente controllata dallo splicing alternativo e da regolatori di feedback, rendendolo un nodo chiave nella comunicazione epitelio–mesenchima e nella definizione dei pattern morfogenetici. Un’attività di FGFR2 deregolata o un utilizzo alterato delle isoforme è implicata in disturbi dello sviluppo craniofacciale ed è frequentemente associata a fenotipi di segnalazione oncogenica in diversi contesti tumorali.

Bek/FGFR2 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus FGFR2 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di FGFR2. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di FGFR2. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con FGFR2 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.