BCLAF1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-428381

Panoramica

Bclaf1 codifica BCLAF1, un fattore nucleare legante DNA e RNA implicato nella regolazione della trascrizione, nello splicing del pre‑mRNA e nel controllo dell’espressione genica associato alla cromatina. BCLAF1 è stato collegato alle risposte al danno del DNA e a programmi legati all’apoptosi tramite interazioni con la segnalazione della famiglia BCL2 e con reti trascrizionali sensibili allo stress. Nelle cellule murine, BCLAF1 contribuisce al mantenimento della stabilità del genoma e alla regolazione di vie del ciclo cellulare e della sopravvivenza che modellano l’espressione genica rilevante per lo sviluppo e per il sistema immunitario. Un’attività deregolata di BCLAF1 è stata associata a una capacità proliferativa alterata e a fenotipi anomali di processamento dell’RNA, rilevanti per la biologia del cancro e per contesti di segnalazione neuro‑immune.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO BCLAF1 (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Bclaf1 in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Bclaf1 insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Bclaf1 a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina BCLAF1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Bclaf1 per lo studio della segnalazione di BCLAF1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Bclaf1 critici per la funzione di BCLAF1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Bclaf1 per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal BCLAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal BCLAF1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Bclaf1. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal BCLAF1 Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR BCLAF1 (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Bclaf1 per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Bclaf1 definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.