BCLAF1 Plasmide di attivazione CRISPR (m): sc-428381-ACT

Mouse BCLAF1 (Bclaf1) codifica BCLAF1, un fattore nucleare legante DNA/RNA che integra il controllo della trascrizione con lo splicing del pre‑mRNA e l’espressione genica in risposta allo stress. È stato collegato alla regolazione di programmi associati ad apoptosi e autofagia e partecipa a processi associati alla cromatina che modellano la progressione del ciclo cellulare e le risposte al danno al DNA. Attraverso queste attività, BCLAF1 influenza le decisioni sul destino cellulare in contesti immunitari ed epiteliali ed è spesso studiato in vie rilevanti per la trasformazione oncogenica e la segnalazione infiammatoria. La deregolazione delle reti di trascrizione e di processamento dell’RNA dipendenti da BCLAF1 è stata associata, in modelli rilevanti per la malattia, ad alterazioni della segnalazione di sopravvivenza e a fenotipi di instabilità del genoma.

BCLAF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di Bclaf1 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BCLAF1 Il plasmide di attivazione CRISPR (m) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus Bclaf1 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione Bclaf1, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BCLAF1. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus Bclaf1 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BCLAF1 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BCLAF1 nelle cellule tumorali con espressione di Bclaf1 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.