Bcl-xS/L Plasmide Double Nickase (h): sc-400170-NIC
- Specie Target: human
- 20 µg di DNA plasmidico purificato, pronto per trasfezione; sufficiente fino a 20 trasfezioni
- Bcl-xS/L Plasmide Double Nickase (h) consiste in un paio di plasmidi ciascuno codificante una nucleasi Cas9 mutata D10A ed un RNA guida (gRNA) di 20 nt target specifico, disegnato per il silenziamento dell'espressione genica con una maggiore specificità rispetto alla controparte CRISPR/Cas9 KO
- Le sequenze di gRNA appaiate sono offset di circa 20 bp per permettere lo specifico doppio nicking Cas9 mediato che mima un DSB
- Un plasmide dei due contiene un gene per la resistenza alla puromicina per la selezione; l'altro plasmide nella coppia contiene un marker GFP per confermare la trasfezione visivamente.
- Il Bcl-xS/L Double Nickase Plasmid (h) e il Bcl-xS/L Double Nickase Plasmid (h2) codificano per distinti design di gRNA accoppiati che prendono di mira BCL2L1. Uno o entrambi i design potrebbero essere disponibili
- In seguito alla trasfezione, l'efficienza dll'attivazione genica può essere testata con WB, IF o IHC utilizzando l'anticorpo: Bcl-xL Antibody (H-5): sc-8392
Informazioni ordini
| Nome del prodotto | Codice del prodotto | UNITÀ | Prezzo | Quantità | Preferiti | |
Bcl-xS/L Plasmide Double Nickase (h) | sc-400170-NIC | 20 µg | $410.00 | |||
Bcl-xS/L Plasmide Double Nickase (h2) | sc-400170-NIC-2 | 20 µg | $410.00 |
BCL2L1 codifica le isoforme proteiche umane Bcl-xS/L, regolatori centrali della permeabilizzazione della membrana mitocondriale esterna e dell’apoptosi intrinseca. Bcl-xL è prevalentemente anti-apoptotica, in quanto limita l’attivazione di BAX/BAK e il rilascio del citocromo c, mentre Bcl-xS contrasta i segnali pro-sopravvivenza e può sensibilizzare le cellule a stimoli apoptotici. Integrandosi con le risposte allo stress mediate da p53 e con vie di sopravvivenza quali PI3K–AKT e MAPK, BCL2L1 influenza le decisioni sul destino cellulare, l’omeostasi mitocondriale e l’adattamento allo stress cellulare. Un’espressione deregolata di BCL2L1 e un’alterazione dell’equilibrio tra isoforme sono frequentemente associate all’elusione dell’apoptosi, alla resistenza alle terapie e alla progressione tumorale, rendendolo un bersaglio comune negli studi meccanicistici sulla morte e sulla sopravvivenza cellulare.
Bcl-xS/L Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BCL2L1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BCL2L1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BCL2L1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.
Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BCL2L1 interrotto.
Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.