Bcl-3 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-400740-LAC

BCL3 codifica per Bcl-3, un membro atipico della famiglia IκB che opera prevalentemente nel nucleo come co-regolatore trascrizionale degli omodimeri NF-κB p50 e p52. Modulando l’espressione genica dipendente da κB, Bcl-3 influenza la segnalazione infiammatoria, il controllo del ciclo cellulare e i programmi di sopravvivenza, e interagisce con vie che regolano le risposte citochiniche e la differenziazione. Un’attività deregolata di BCL3 è stata associata ad alterazioni della funzione delle cellule immunitarie e a stati trascrizionali oncogenici, rendendolo un nodo utile per studiare la dinamica della via di NF-κB in modelli cellulari umani. In quanto regolatore dipendente dal contesto, Bcl-3 è spesso investigato per i suoi ruoli nella riprogrammazione trascrizionale, nella regolazione associata alla cromatina e nella segnalazione responsiva allo stress.

Le particelle di attivazione lentivirale Bcl-3 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di BCL3 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale Bcl-3 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione BCL3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di Bcl-3. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo BCL3 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.