BCAR3 Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-404301-ACT

BCAR3 (breast cancer anti-estrogen resistance 3) codifica una proteina adattatrice che collega la segnalazione mediata da recettori e integrine al rimodellamento del citoscheletro e alla motilità. BCAR3 interagisce con CAS/BCAR1 e con componenti correlati delle adesioni focali per modulare l’attività delle chinasi della famiglia Src, la segnalazione delle piccole GTPasi e le vie a valle che influenzano adesione, migrazione e proliferazione cellulare. Attraverso queste connessioni di rete, BCAR3 contribuisce alla regolazione delle dinamiche epitelio–mesenchimali e di segnali di crescita dipendenti dal contesto. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di BCAR3 sono state associate all’invasione delle cellule tumorali e a fenotipi di risposta endocrina, rendendolo un nodo utile per studiare programmi oncogenici guidati dall’adesione.

BCAR3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCAR3 senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BCAR3 Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCAR3 nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCAR3, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BCAR3. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCAR3 nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BCAR3 nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BCAR3 nelle cellule tumorali con espressione di BCAR3 silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.