BCAM Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-405080-ACT

BCAM (basal cell adhesion molecule; glicoproteina del gruppo sanguigno Lutheran) è un recettore transmembrana della superfamiglia delle immunoglobuline che si lega alle isoforme contenenti laminina α5 all’interno delle membrane basali. Mediando l’adesione cellula–matrice, BCAM contribuisce alle interazioni epiteliali ed endoteliali, all’organizzazione del citoscheletro e alla regolazione della motilità cellulare e dell’integrità tissutale. La segnalazione di adesione associata a BCAM si interfaccia con i processi di rimodellamento della matrice extracellulare e può influenzare i microambienti vascolari e infiammatori. Un’alterata espressione di BCAM è stata collegata a fenotipi di adesione deregolati osservati in contesti ematologici e di tumori solidi, supportandone l’uso come marcatore e nodo meccanicistico per lo studio del traffico cellulare rilevante per la malattia e delle interazioni con il microambiente.

BCAM Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BCAM senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

BCAM Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BCAM nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BCAM, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di BCAM. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BCAM nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da BCAM nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via BCAM nelle cellule tumorali con espressione di BCAM silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.