BAT2 Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-409707-LAC

PRRC2A codifica la proteina umana BAT2, un grande fattore legante l’RNA ricco di prolina implicato nella regolazione genica post-trascrizionale e nel controllo della stabilità e della traduzione dell’mRNA. BAT2 è stata associata alla biologia dei granuli di RNA responsivi allo stress e a una più ampia regolazione di programmi trascrizionali legati all’immunità, in linea con la sua prossimità genomica alla regione MHC di classe III. Variazioni o un’espressione alterata di PRRC2A/BAT2 sono state riportate in studi su fenotipi infiammatori e autoimmuni e in firme di espressione associate al cancro, a supporto della sua rilevanza per vie che governano l’attivazione immunitaria, le transizioni di stato cellulare e la proliferazione. Queste caratteristiche rendono PRRC2A un nodo utile per indagare come le proteine regolatrici dell’RNA modulino gli output di segnalazione in contesti cellulari rilevanti per la malattia.

Le particelle di attivazione lentivirale BAT2 (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di PRRC2A in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale BAT2 (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione PRRC2A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di BAT2. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo PRRC2A e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.