BARD1 Plasmide Double Nickase (h): sc-401212-NIC

BARD1 (BRCA1 associated RING domain 1) è una proteina oncosoppressore che forma un eterodimero obbligato con BRCA1, dando origine a un complesso E3 ubiquitina-ligasi centrale per la stabilità del genoma. Questo complesso coordina la riparazione delle rotture a doppio filamento del DNA, la protezione della forcella di replicazione e la segnalazione dei checkpoint del ciclo cellulare, collegando BARD1 alla ricombinazione omologa e a vie più ampie della risposta al danno del DNA. Attraverso i suoi domini RING e a ripetizioni ankyrin, BARD1 contribuisce a regolare l’ubiquitinazione delle proteine e il reclutamento dei fattori di riparazione nei siti di danno. La disregolazione o varianti patogene di BARD1 sono state associate a una ridotta capacità di riparazione del DNA e a un’aumentata instabilità genomica, a supporto della sua rilevanza negli studi sui meccanismi di suscettibilità al cancro.

BARD1 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus BARD1 nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di BARD1. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di BARD1. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con BARD1 interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.