BAF53 Plasmide Double Nickase (h): sc-403200-NIC

ACTL6A codifica BAF53A, una subunità correlata all’actina del complesso di rimodellamento della cromatina SWI/SNF (BAF) ATP-dipendente, che modula il posizionamento dei nucleosomi e l’accessibilità della cromatina. Attraverso la regolazione dei paesaggi di enhancer e promotori, BAF53A contribuisce al controllo trascrizionale della progressione del ciclo cellulare, della specificazione di linea e del mantenimento di stati proliferativi, intersecando vie quali i programmi trascrizionali associati a MYC ed E2F. Un’alterata attività di ACTL6A/BAF53A è stata collegata a un controllo epigenetico deregolato in molteplici contesti tumorali e a un’espressione aberrante di geni dello sviluppo, rendendolo un nodo utile per lo studio di fenotipi guidati dalla cromatina. L’analisi funzionale di ACTL6A supporta la ricerca meccanicistica sulle dipendenze dal rimodellamento della cromatina, sulla plasticità trascrizionale e sull’architettura regolatoria a livello dell’intero genoma nelle cellule umane.

BAF53 Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus ACTL6A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di ACTL6A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di ACTL6A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con ACTL6A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.