B7RP-1 Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406855

Panoramica

ICOSLG codifica il ligando inducibile del costimolatore delle cellule T (B7RP-1), una molecola di checkpoint immunitario della famiglia B7 espressa dalle cellule presentanti l’antigene e dai compartimenti stromali, che si lega a ICOS sulle cellule T attivate. Questa interazione promuove segnali costimolatori che sostengono la proliferazione e la sopravvivenza delle cellule T e i programmi di citochine, influenzando le reazioni del centro germinativo, la differenziazione delle cellule T follicolari helper e le risposte anticorpali con switch di classe. La segnalazione ICOSLG–ICOS si intreccia con vie dipendenti da PI3K-AKT e modula il crosstalk tra cellule dell’immunità innata e adattativa nei tessuti infiammati e nei microambienti tumorali. Un’espressione o una segnalazione di ICOSLG deregolata è stata implicata nell’infiammazione autoimmune, nelle malattie allergiche, nell’immunobiologia dei trapianti e in meccanismi di evasione immunitaria rilevanti per la ricerca sul cancro e sulle infezioni croniche.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO B7RP-1 (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ICOSLG in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ICOSLG insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ICOSLG a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina B7RP-1.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ICOSLG per lo studio della segnalazione di B7RP-1, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ICOSLG critici per la funzione di B7RP-1
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ICOSLG per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal B7RP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal B7RP-1 CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ICOSLG. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal B7RP-1 Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR B7RP-1 (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ICOSLG per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ICOSLG definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.