B-Myb Particelle di Attivazione Lentivirale (h2): sc-401318-LAC-2

Il gene umano MYBL2 codifica il fattore di trascrizione B-Myb, un regolatore della famiglia Myb che coordina la progressione del ciclo cellulare controllando l’espressione dei geni necessari per la transizione G1/S, la replicazione del DNA e l’ingresso in mitosi. B-Myb agisce all’interno dell’asse regolatorio DREAM–MMB e coopera con la segnalazione guidata da E2F e dai complessi ciclina/CDK per modulare programmi trascrizionali associati alla cromatina e la stabilità del genoma. Un’attività di MYBL2 deregolata è spesso collegata a fenotipi proliferativi ed è stata associata a firme trascrizionali oncogeniche in molteplici contesti tumorali, rendendolo un nodo molecolare utile per studiare il controllo del ciclo cellulare e il rimodellamento trascrizionale. L’editing genetico di MYBL2 consente interrogazioni meccanicistiche dei checkpoint proliferativi, delle risposte allo stress replicativo e della mappatura delle dipendenze dai fattori di trascrizione in modelli cellulari umani.

Le particelle di attivazione lentivirale B-Myb (h2) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di MYBL2 in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale B-Myb (h2) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione MYBL2, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di B-Myb. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo MYBL2 e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.