B-ATF Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401553-ACT

BATF (B-ATF) è un fattore di trascrizione con dominio basic leucine zipper (bZIP) che forma eterodimeri con proteine della famiglia JUN per legarsi a elementi regolatori di tipo AP-1 e modellare programmi di espressione genica specifici di linea cellulare. Nelle cellule immunitarie umane, BATF è un regolatore chiave della differenziazione dei linfociti T e della loro funzione effettrice, incluse le vie che controllano la produzione di citochine, la biologia delle cellule T helper follicolari e l’attivazione dell’immunità adattativa. Cooperando con membri della famiglia IRF su motivi di DNA compositi, BATF influenza l’accessibilità della cromatina e le reti trascrizionali che coordinano la segnalazione immunitaria e le risposte allo stress cellulare. Un’attività deregolata di BATF è stata associata ad alterazioni del fenotipo immunitario ed è stata implicata in meccanismi di malattia infiammatoria e in stati trascrizionali oncogenici in contesti linfoidi, rendendolo un nodo utile per studi meccanicistici sul controllo trascrizionale.

B-ATF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di BATF senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

B-ATF Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus BATF nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione BATF, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di B-ATF. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus BATF nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da B-ATF nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via B-ATF nelle cellule tumorali con espressione di BATF silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.