Axl Plasmídeo de ativação de CRISPR (h): sc-400393-ACT

O AXL humano codifica a Axl, uma tirosina‑quinase receptora da família TAM que é ativada por ligantes como o GAS6 para regular a sobrevivência celular, a proliferação, a migração e a depuração de células apoptóticas. A sinalização de Axl envolve nós das vias PI3K–AKT, MAPK/ERK e NF-κB e contribui para a transição epitélio–mesênquima, a remodelação do citoesqueleto e a modulação das respostas imunes inatas. A expressão ou atividade desregulada de AXL tem sido associada a fenótipos tumorais invasivos, a alterações nas interações estroma–imune e a estados de sinalização semelhantes aos de resistência em múltiplos modelos de câncer. Além da oncologia, o controle, mediado por Axl, do tônus inflamatório e de programas fagocíticos liga o AXL à fibrose, à biologia vascular e à regulação imune relevante para doenças infecciosas em sistemas experimentais.

Axl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) oferece uma abordagem direcionada e não destrutiva para regular positivamente a expressão endógena de AXL sem alterar a sequência de ADN subjacente.

Axl O Plasmídeo de Ativação CRISPR (h) é um sistema mediador de ativação sinérgica (SAM) de três plasmídeos, concebido para a regulação positiva transcricional altamente eficiente e específica do locus AXL em linhas celulares humanas. O sistema é construído em torno de uma Cas9 cataliticamente inativa (dCas9) portadora de duas mutações inativadoras (D10A e N863A) que eliminam a atividade nuclease, preservando simultaneamente a ligação ao ADN. Esta dCas9 é fundida com VP64, um potente ativador transcricional, e é coexpressa com um gene de resistência à blasticidina para seleção. O segundo plasmídeo codifica a proteína de fusão MS2-p65-HSF1, um complexo ativador secundário que atua em conjunto com o dCas9-VP64, juntamente com um gene de resistência à higromicina. O terceiro plasmídeo codifica um sgRNA de 20 nt específico para o alvo, fundido a dois aptâmeros de RNA MS2 que recrutam o complexo MS2-p65-HSF1 para o local de ativação, acompanhado por um gene de resistência à puromicina. Os três plasmídeos são administrados numa proporção de massa de 1:1:1 para uma expressão equilibrada de todos os componentes do sistema.

Uma vez montado no locus alvo, o complexo SAM liga-se a cerca de 200 pb a montante do local de início da transcrição AXL, onde VP64, p65 e HSF1 atuam em conjunto para recrutar a maquinaria transcricional e impulsionar a regulação positiva da expressão endógena de Axl. Ao contrário da Cas9 com atividade nuclease, o dCas9 não introduz quebras de cadeia dupla nem modifica a sequência genómica, preservando o locus AXL nativo e permitindo o estudo de respostas transcricionais dependentes de Axl no locus endógeno, tornando-o uma ferramenta valiosa para estudos funcionais, identificação de genes-alvo e modelagem da restauração da via Axl em células tumorais com expressão de AXL silenciada ou reduzida.

Apenas para uso em investigação. Não se destina a uso diagnóstico ou terapêutico.