AVP Receptor V1a Plasmide Double Nickase (h): sc-401691-NIC

AVPR1A codifica il recettore umano 1A dell’arginina vasopressina (recettore AVP V1a), un recettore accoppiato a proteine G che si associa principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi Cβ, aumentando il Ca²⁺ intracellulare e il diacilglicerolo e attivando così la segnalazione della protein chinasi C. Questo recettore modula la contrazione della muscolatura liscia vascolare, la funzione piastrinica, la glicogenolisi epatica e la segnalazione neuroendocrina, integrando le risposte alla vasopressina nei tessuti periferici e nel sistema nervoso centrale. Le vie dipendenti da AVPR1A intersecano i programmi MAPK/ERK e dei geni a risposta immediata, collegando l’attivazione del recettore a risposte trascrizionali e cellulari dipendenti dal contesto. La deregolazione della segnalazione di AVPR1A o le varianti genetiche sono state investigate in relazione a fenotipi cardiovascolari e metabolici, oltre che a tratti neurocomportamentali, a supporto della sua rilevanza per studi meccanicistici delle vie responsivi alla vasopressina.

AVP Receptor V1a Il plasmide Double Nickase (h) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus AVPR1A nelle linee cellulari human. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di AVPR1A. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di AVPR1A. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con AVPR1A interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.