AVP Receptor V1a Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-401691

Panoramica

AVPR1A codifica il recettore V1a della vasopressina arginina, un GPCR di tipo rodopsina che si accoppia principalmente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, generando segnali IP3/DAG che aumentano il Ca²⁺ intracellulare e stimolano programmi trascrizionali dipendenti da PKC. La segnalazione del recettore V1a regola la contrazione della muscolatura liscia vascolare, la reattività piastrinica, la glicogenolisi epatica e circuiti neuromodulatori coinvolti nei comportamenti sociali e legati allo stress. Nelle cellule, l’attività di AVPR1A interseca la segnalazione MAPK/ERK, la regolazione genica Ca²⁺-dipendente e il rimodellamento del citoscheletro che influenzano contrattilità e migrazione. La disregolazione della segnalazione vasopressina–V1a è stata studiata in relazione a fenotipi cardiovascolari e metabolici e ad associazioni con tratti neuropsichiatrici, a supporto di studi meccanicistici della funzione recettoriale in diversi contesti tissutali.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO AVP Receptor V1a (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene AVPR1A in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del AVPR1A insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto AVPR1A a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina AVP Receptor V1a.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di AVPR1A per lo studio della segnalazione di AVP Receptor V1a, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni AVPR1A critici per la funzione di AVP Receptor V1a
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di AVPR1A per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal AVP Receptor V1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal AVP Receptor V1a CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus AVPR1A. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal AVP Receptor V1a Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR AVP Receptor V1a (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia AVPR1A per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio AVPR1A definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.