AVP Receptor V1a Plasmide di attivazione CRISPR (h): sc-401691-ACT

AVPR1A codifica per il recettore umano 1A dell’arginina vasopressina (V1a), un GPCR a sette domini transmembrana che si accoppia prevalentemente a Gq/11 per attivare la fosfolipasi C, la segnalazione degli inositol fosfati, la mobilizzazione intracellulare di Ca²⁺ e programmi trascrizionali dipendenti dalla PKC. La segnalazione mediata da V1a influenza il tono della muscolatura liscia vascolare, le risposte piastriniche ed endoteliali e i circuiti neuroendocrini che regolano la reattività allo stress e il comportamento sociale, integrandosi con la via MAPK/ERK e altri percorsi a valle. Alterazioni dell’espressione o della segnalazione di AVPR1A sono state studiate in ambito cardiovascolare e neuropsichiatrico, inclusi la regolazione della pressione arteriosa, fenotipi vasocostrittivi e studi di associazione con tratti comportamentali. Questi collegamenti rendono AVPR1A un bersaglio utile per analizzare la trasduzione del segnale dei GPCR e la biologia dell’asse della vasopressina in modelli cellulari.

AVP Receptor V1a Il plasmide di attivazione CRISPR (h) fornisce un approccio mirato e non distruttivo per sovraregolare l'espressione endogena di AVPR1A senza alterare la sequenza di DNA sottostante.

AVP Receptor V1a Il plasmide di attivazione CRISPR (h) è un sistema SAM (mediatore di attivazione sinergico) a tre plasmidi progettato per la sovraregolazione trascrizionale altamente efficiente e sito-specifica del locus AVPR1A nelle linee cellulari umane. Il sistema è costruito attorno a una Cas9 cataliticamente inattiva (dCas9) che porta due mutazioni inattivanti (D10A e N863A) che eliminano l'attività nucleasica preservando al contempo il legame con il DNA. Questa dCas9 è fusa con VP64, un potente attivatore trascrizionale, ed è coespressa con un gene di resistenza alla blasticidina per la selezione. Il secondo plasmide codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1, un complesso attivatore secondario che agisce in sinergia con dCas9-VP64, insieme a un gene di resistenza all'igromicina. Il terzo plasmide codifica un sgRNA specifico per il bersaglio di 20 nt fuso a due aptameri di RNA MS2 che reclutano il complesso MS2-p65-HSF1 nel sito di attivazione, accompagnato da un gene di resistenza alla puromicina. I tre plasmidi vengono somministrati in un rapporto di massa 1:1:1 per un'espressione bilanciata di tutti i componenti del sistema.

Una volta assemblato nel locus bersaglio, il complesso SAM si lega a circa 200 bp a monte del sito di inizio della trascrizione AVPR1A, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo concertato per reclutare il machinery trascrizionale e guidare la sovraregolazione dell'espressione endogena di AVP Receptor V1a. A differenza della Cas9 con attività nucleasica, dCas9 non introduce rotture a doppio filamento né modifica la sequenza genomica, preservando il locus AVPR1A nativo e consentendo lo studio delle risposte trascrizionali dipendenti da AVP Receptor V1a nel locus endogeno, rendendolo uno strumento prezioso per studi funzionali, l'identificazione di geni bersaglio e la modellizzazione del ripristino della via AVP Receptor V1a nelle cellule tumorali con espressione di AVPR1A silenziata o ridotta.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.