ATP5S Plasmide KO CRISPR/Cas9 (h): sc-406318

Panoramica

ATP5S codifica una piccola componente accessoria del complesso mitocondriale F1F0 ATP sintasi (Complesso V), che catalizza la produzione di ATP utilizzando la forza proton-motrice generata dalla fosforilazione ossidativa. La corretta funzione di ATP5S sostiene la bioenergetica mitocondriale, il mantenimento del potenziale di membrana e il coordinamento del metabolismo energetico cellulare con processi quali l’apoptosi e l’omeostasi delle specie reattive dell’ossigeno (ROS). Alterazioni nell’assemblaggio dell’ATP sintasi o nell’attività del Complesso V sono associate a disfunzione mitocondriale, un tratto distintivo osservato in una gamma di condizioni che includono fenotipi neuromuscolari e neurodegenerativi, nonché il rimodellamento metabolico dei tumori. Di conseguenza, ATP5S è rilevante per studi sulla respirazione mitocondriale, sulle risposte allo stress energetico e sulle vie di segnalazione mitocondriali che influenzano le decisioni sul destino cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP5S (h) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene ATP5S in linee cellulari human. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del ATP5S insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto ATP5S a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATP5S.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di ATP5S per lo studio della segnalazione di ATP5S, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni ATP5S critici per la funzione di ATP5S
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di ATP5S per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATP5S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h) e dal ATP5S CRISPR/Cas9 KO Plasmid (h2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus ATP5S. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATP5S Plasmide HDR (h) e il plasmide HDR ATP5S (h2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia ATP5S per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio ATP5S definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.