ATP5B Plasmide Double Nickase (m): sc-419247-NIC

Atp5b codifica la subunità β dell’ATP sintasi mitocondriale (ATP5B), un componente fondamentale del complesso V della fosforilazione ossidativa che catalizza la produzione di ATP a partire da ADP e fosfato inorganico. ATP5B sostiene la conversione energetica accoppiata al gradiente protonico attraverso la membrana mitocondriale interna e contribuisce al mantenimento del potenziale di membrana mitocondriale, della capacità respiratoria e dell’omeostasi bioenergetica cellulare. L’alterazione della funzione dell’ATP sintasi può influenzare la gestione delle specie reattive dell’ossigeno, la segnalazione metabolica e le risposte allo stress, collegando le vie associate ad ATP5B a fenotipi di disfunzione mitocondriale studiati nella neurodegenerazione, nelle patologie cardiometaboliche e nel metabolismo tumorale. Nei modelli murini, Atp5b è ampiamente utilizzato per indagare in che modo la produzione mitocondriale di ATP limiti la proliferazione e la differenziazione cellulare e le richieste energetiche specifiche dei tessuti.

ATP5B Il plasmide Double Nickase (m) consiste in una coppia di plasmidi ingegnerizzati per l'editing ad alta specificità del locus Atp5b nelle linee cellulari mouse. Ciascun plasmide esprime una nickasi Cas9 D10A e un sgRNA distinto che prende di mira filamenti di DNA opposti all'interno di Atp5b. Quando indirizzate verso siti adiacenti su filamenti di DNA opposti, le due nickasi generano tagli a filamento singolo sfalsati che insieme producono una rottura a doppio filamento sfalsata, richiedendo un'attività coordinata sul bersaglio da entrambe le guide. La rottura del DNA risultante viene risolta da vie di riparazione cellulare endogene, più comunemente attraverso la giunzione non omologa delle estremità (NHEJ), portando a inserzioni o delezioni che interrompono la funzione di Atp5b. Richiedendo il coinvolgimento di due sgRNA nel locus bersaglio, l'approccio a doppia nickasi migliora la specificità dell'editing e fornisce una strategia CRISPR complementare per applicazioni in cui è desiderato un controllo aggiuntivo sulla precisione del targeting.

Per supportare l'identificazione efficiente delle cellule modificate, un plasmide codifica la GFP per la visualizzazione fluorescente delle popolazioni trasfettate, mentre il plasmide di accompagnamento porta un gene di resistenza alla puromicina per la selezione antibiotica. Insieme, queste caratteristiche supportano l'arricchimento efficiente delle popolazioni co-trasfettate e semplificano la convalida dei cloni con Atp5b interrotto.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.