ATP11C Plasmide KO CRISPR/Cas9 (m): sc-435843

Panoramica

Atp11c codifica ATP11C, una flippasi di fosfolipidi P4-ATPasi che mantiene l’asimmetria lipidica della membrana plasmatica traslocando aminofosfolipidi come la fosfatidilserina dal foglietto esterno a quello interno. Questa attività supporta il traffico vescicolare, l’endocitosi e i processi di rimodellamento di membrana che influenzano la segnalazione dei recettori e i programmi di sopravvivenza cellulare. Nel topo, la funzione di ATP11C è stata collegata all’omeostasi del sistema ematopoietico e immunitario; la sua alterazione compromette lo sviluppo delle cellule B e la biologia eritroide, risultando quindi rilevante per studi su fenotipi simili a immunodeficienza e su meccanismi legati all’anemia. La distribuzione lipidica di membrana regolata da ATP11C può inoltre modulare la rimozione delle cellule apoptotiche e la segnalazione infiammatoria tramite l’esposizione di fosfatidilserina sulla superficie cellulare.

Il plasmide CRISPR/Cas9 KO ATP11C (m) è un pool di plasmidi progettato per la distruzione mirata del gene Atp11c in linee cellulari mouse. Ciascun plasmide co-esprime un singolo RNA guida (sgRNA) unico che prende di mira un sito distinto all'interno del Atp11c insieme alla nucleasi Cas9 di Streptococcus pyogenes. I plasmidi codificano anche per la GFP, consentendo l'identificazione fluorescente e l'arricchimento delle cellule trasfettate con successo tramite microscopia a fluorescenza o citometria a flusso.

Il design multi-guida aumenta la probabilità di generare inserzioni o delezioni (indels) che interrompono il frame di lettura aperto Atp11c a seguito della formazione di rotture a doppio filamento mediate da Cas9. Le rotture del DNA introdotte dal sistema CRISPR/Cas9 vengono riparate attraverso vie endogene di giunzione non omologa (NHEJ), che spesso provocano mutazioni con spostamento del frame che annullano l'espressione della proteina ATP11C.

Questo sistema di knockout CRISPR consente la generazione efficiente di modelli cellulari carenti di Atp11c per lo studio della segnalazione di ATP11C, studi di genomica funzionale, ricerca sulla biologia del cancro e valutazione delle risposte terapeutiche in linee cellulari umane.

Caratteristiche principali

• sgRNA mirati agli esoni Atp11c critici per la funzione di ATP11C
  Co-espressione di SpCas9 e sgRNA da un singolo plasmide per una somministrazione semplificata
  Reporter GFP per l'identificazione delle cellule trasfettate
  Pool di plasmidi mirati a più siti genomici di Atp11c per migliorare l'efficienza del knockout
  Compatibile con la somministrazione tramite trasfezione

Varianti di progettazione

CRISPR +/- HDR

• Gli gRNA codificati dal ATP11C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m) e dal ATP11C CRISPR/Cas9 KO Plasmid (m2) prendono di mira siti distinti all'interno del locus Atp11c. Potrebbe essere disponibile uno o entrambi i design di targeting. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.
  I costrutti donatori HDR codificati dal ATP11C Plasmide HDR (m) e il plasmide HDR ATP11C (m2) contengono una cassetta di resistenza alla puromicina e un reporter RFP affiancato da bracci di omologia Atp11c per supportare la riparazione diretta dall'omologia in siti bersaglio Atp11c definiti corrispondenti ai disegni CRISPR/Cas9 KO. La disponibilità dei donatori HDR può variare. Vedere Prodotti correlati per la disponibilità.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.