ATP11B Particelle di Attivazione Lentivirale (h): sc-411692-LAC

ATP11B codifica una flippasi di fosfolipidi P4-ATPasi che contribuisce a mantenere l’asimmetria lipidica delle membrane plasmatiche e degli organelli traslocando aminofosfolipidi attraverso i doppi strati in modo dipendente dall’ATP. Regolando la composizione di membrana, ATP11B influenza la formazione di vescicole, il traffico endosomiale e i processi di riciclo che si intersecano con il trasporto Golgi–endosoma e con le dinamiche più ampie della via secretoria. L’alterazione dell’asimmetria lipidica e del trafficking può incidere su segnalazione, polarità cellulare e risposte allo stress, rendendo ATP11B rilevante per studi sull’omeostasi di membrana e su fenotipi associati al trasporto. Modifiche dell’attività o dell’espressione di ATP11B sono state esaminate nel contesto di comportamenti cellulari rilevanti per la malattia, come la gestione dei farmaci, la sopravvivenza sotto stress e cambiamenti nella distribuzione intracellulare delle proteine di membrana.

Le particelle di attivazione lentivirale ATP11B (h) rispondono a questa esigenza incapsulando il sistema completo di attivazione trascrizionale del mediatore di attivazione sinergica (SAM) in particelle lentivirali ad alto titolo pronte per la trasduzione, consentendo un'efficiente sovraregolazione di ATP11B in una gamma più ampia di tipi di cellule umane.

Le particelle di attivazione lentivirale ATP11B (h) veicolano tutti i componenti funzionali del sistema del mediatore di attivazione sinergica (SAM) tramite trasduzione lentivirale. Il sistema comprende tre preparati di particelle co-trasdotti nelle cellule bersaglio: uno che codifica per dCas9 cataliticamente inattivo (mutazioni D10A e N863A) fuso al dominio di transattivazione VP64 con un gene di resistenza alla blasticidina; una che codifica la proteina di fusione MS2-p65-HSF1 con un gene di resistenza all'igromicina; e una che codifica un sgRNA di 20 nt specifico per il bersaglio fuso a due aptameri di RNA MS2 con un gene di resistenza alla puromicina. A seguito della trasduzione lentivirale e dell'integrazione genomica dei cassetti di espressione, i componenti del SAM vengono espressi in modo stabile e si assemblano nel locus bersaglio all'interno della regione promotrice prossimale a monte del sito di inizio della trascrizione ATP11B, dove VP64, p65 e HSF1 agiscono in modo cooperativo per reclutare il machinery trascrizionale endogeno e guidare una sovraregolazione sostenuta dell'espressione endogena di ATP11B. L'uso di dCas9 inattivo nei confronti delle nucleasi evita l'introduzione di rotture del DNA a doppio filamento e preserva il locus genomico nativo ATP11B e l'architettura regolatoria.

Il formato lentivirale offre diversi vantaggi pratici: l'integrazione genomica stabile supporta l'attivazione ereditaria attraverso le divisioni cellulari; le preparazioni di particelle ad alto titolo eliminano la necessità di una produzione virale interna; e la compatibilità con tipi di cellule primarie, non in divisione e resistenti alla trasfezione amplia l'accessibilità sperimentale. Il successo della trasduzione può essere confermato e potenziato attraverso una selezione antibiotica tripla utilizzando puromicina, igromicina e blasticidina.

Solo per uso di ricerca. Non destinato a uso diagnostico o terapeutico.